pTSC
pTSC复合体是由TSC1（Hamartin，130 kDa）、TSC2（Tuberin，200 kDa）和辅助蛋白TBC1D7（35 kDa，稳定TSC1和TSC2之间的相互作用）组成的异源三聚体。这种大分子三聚体结构使得pTSC复合体在体外纯化时变得极为困难。目前，在样品制备阶段采用化学交联或石墨烯氧化物涂层网格技术，已获得近乎完整的冷冻电镜密度图，然而，这些方法可能无法反映pTSC的天然构象状态。
多伦多大学的Mazhab-Jafari实验室开发了一种新策略，旨在研究pTSC复合体的天然构型。他们利用“诱饵”抗体从动物脑组织中捕获内源性pTSC。这种“诱饵”抗体是基于抗TSC2单抗设计的重组Fab片段。首先，团队使用Rapid Novor（快序生物）的REmAb单克隆抗体测序服务来测定抗TSC2抗体的可变区完整氨基酸序列，这些序列为合理设计和工程化重组表达抗TSC2抗体的轻重链提供了基础。利用重组表达的Fab片段，研究人员直接从大鼠和猪的脑组织中纯化出pTSC复合体。随后，他们使用负染色电子显微镜（NSEM）对纯化的pTSC样品进行了可视化，并进一步通过免疫金电子显微镜（IGEM）技术，评估了TSC1和TSC2亚基的空间位置。有趣的是，在电镜下观察到了柔性丝状物，这表明内源性pTSC可能聚合成丝状超结构。
尽管重组蛋白的表达和纯化是制备蛋白样品的标准方法，但对于一些“难以表达”的蛋白或蛋白复合体来说，这是一个极为繁琐的过程。此项研究开辟了一条从天然来源分离蛋白的新途径。通过单克隆抗体测序服务测出抗体的氨基酸序列，并将其工程化以精确捕获那些难以表达的蛋白或蛋白复合体，例如pTSC。这种创新的纯化策略，不仅提高了捕获目标蛋白的能力，而且极大地简化了蛋白结构的表征过程。
利用抗TSC2抗体序列设计和重组表达Fab片段来纯化pTSC
关键点：
使用Rapid Novor（快序生物）的单克隆抗体测序服务测出了抗TSC2抗体的可变区序列。根据序列信息重组表达Fab片段，以从天然哺乳动物脑组织中纯化pTSC。
新颖的重组蛋白表达与纯化技术，为获取多样化的蛋白及蛋白复合体奠定了基础，特别是对于传统方法难以表达的蛋白。
参考文献：
Dai, D.L., Hasan, S.M.N., Woollard, G., Abbas, Y.M., Bueler, S.A., Julien, J-P., Rubinstein, J.L., Mazhab-Jafari, T. Structural Characterization of Endogenous Tuberous Sclerosis Protein Complex Revealed Potential Polymeric Assembly.Biochemistry-us 60, 1808–1821 (2021).https://doi.org/10.1021/acs.biochem.1c00269.
